該儀器是一款緊湊型、操作簡(jiǎn)便的電穿孔儀，適用于細(xì)菌、酵母及哺乳動(dòng)物細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染。其核心特點(diǎn)是預(yù)設(shè)了針對(duì)常見細(xì)胞類型的優(yōu)化程序，同時(shí)也支持用戶自定義參數(shù)。

一、伯樂MicroPulser電穿孔儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、目的

規(guī)范伯樂MicroPulser電穿孔儀的標(biāo)準(zhǔn)化操作與日常維護(hù)，確保電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性、高效性，保障操作人員安全，并延長儀器使用壽命。

2、適用范圍

適用于使用伯樂MicroPulser電穿孔儀進(jìn)行微生物（如大腸桿菌）或哺乳動(dòng)物細(xì)胞的電轉(zhuǎn)化/電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

3、安全注意事項(xiàng)

（1）高壓警告：儀器工作時(shí)產(chǎn)生高達(dá)2500V的高壓脈沖。嚴(yán)禁在電擊時(shí)打開樣品槽蓋或觸碰電極。僅在儀器“Ready"指示燈亮起且蜂鳴器提示結(jié)束后，方可開蓋。

（2）個(gè)人防護(hù)：操作時(shí)應(yīng)佩戴絕緣手套。處理生物樣品時(shí)，需同時(shí)佩戴實(shí)驗(yàn)手套。

（3）環(huán)境安全：保持工作區(qū)及儀器表面干燥。避免緩沖液或樣品濺灑到電極或樣品槽內(nèi)。

（4）專用耗材：必須使用一次性無菌電擊杯。禁止重復(fù)使用，以防交叉污染和電弧放電。

（5）樣品要求：電擊杯中的樣品體積必須準(zhǔn)確（通常為40-200µl，常用100µl），且液體不能濺到杯壁外側(cè)，確保電極接觸良好。

4、操作前準(zhǔn)備

A、儀器準(zhǔn)備：

（1）確認(rèn)電源線連接牢固。

（2）打開儀器背面電源開關(guān)。

（3）儀器自檢，屏幕點(diǎn)亮，進(jìn)入主界面。

B、耗材與試劑準(zhǔn)備：

（1）電擊杯：從包裝中取出所需數(shù)量的1mm或2mm間隙（根據(jù)細(xì)胞類型選擇）的一次性無菌電擊杯，置于冰上預(yù)冷（對(duì)溫度敏感的細(xì)胞）。

（2）細(xì)胞與DNA：制備處于對(duì)數(shù)生長期、經(jīng)洗滌并重懸于低電導(dǎo)率緩沖液（如冰冷無菌水或特定電轉(zhuǎn)緩沖液）中的感受態(tài)細(xì)胞/待轉(zhuǎn)染細(xì)胞。將DNA與細(xì)胞懸液輕柔混勻。

（3）回收培養(yǎng)基：準(zhǔn)備好預(yù)熱的富含SOC/LB（細(xì)菌）或培養(yǎng)基（哺乳動(dòng)物細(xì)胞）的回收管。

C、程序選擇：

（1）預(yù)設(shè)程序：按 Pgrm 鍵，使用旋鈕選擇對(duì)應(yīng)的預(yù)設(shè)程序（例如：Ec1 用于大腸桿菌，Sc 用于釀酒酵母，AHC 用于動(dòng)物細(xì)胞高電容模式等）。

（2）自定義程序：按 User Pgrm 鍵，可手動(dòng)設(shè)定電壓 (V)、電容 (µF) 和電阻 (Ω) 參數(shù)。

二、伯樂MicroPulser電穿孔儀標(biāo)準(zhǔn)操作流程

1、步驟一：參數(shù)加載與確認(rèn)、

（1）選擇或設(shè)定好程序后，屏幕會(huì)顯示相應(yīng)的電壓、電容、電阻和時(shí)間常數(shù)（由儀器計(jì)算）。

（2）仔細(xì)核對(duì)參數(shù)是否與實(shí)驗(yàn)方案一致。

2、步驟二：加樣與電擊

（1）用移液器將 DNA-細(xì)胞混合懸液（通常為40-100µl）輕柔、（2）快速地加入預(yù)冷的電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡。

（3）用吸水紙擦干電擊杯外壁，確保無液體殘留。

（4）平穩(wěn)、快速地將電擊杯滑入樣品槽，確保其底部與電極緊密接觸，聽到/感到“咔噠"聲。

（5）關(guān)閉樣品槽蓋。

（6）同時(shí)按下儀器面板上的兩個(gè)脈沖觸發(fā)按鈕（位于左右兩側(cè)，需雙手操作，此為安全設(shè)計(jì)）。

（7）儀器發(fā)出蜂鳴聲，電擊瞬間完成。屏幕顯示實(shí)際施加的電壓和時(shí)間常數(shù)（Time Constant）。記錄此時(shí)間常數(shù)，它是評(píng)估電擊效率的重要指標(biāo)（通常5-20ms為佳）。

3、步驟三：樣品回收

（1）電擊結(jié)束后，儀器再次發(fā)出蜂鳴提示。此時(shí)“Ready"燈亮起。

（2）打開樣品槽蓋，取出電擊杯。

（3）立即向電擊杯中加入0.5-1 ml預(yù)熱的回收培養(yǎng)基（或直接將其全部轉(zhuǎn)移至含回收培養(yǎng)基的試管中）。

（4）用移液器輕輕吹吸數(shù)次，將細(xì)胞溫和、重懸。

（5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至合適的培養(yǎng)容器中，在適宜條件下進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)。

4、步驟四：結(jié)束實(shí)驗(yàn)

（1）棄用過的電擊杯至生物危害垃圾桶。

（2）如果后續(xù)無人使用，關(guān)閉儀器背面電源開關(guān)。

（3）清潔工作區(qū)域。

三、日常與定期維護(hù)流程

1、每次使用后：

（1）檢查并清潔電極：用蘸有70%乙醇的無塵棉簽或鏡頭紙輕輕擦拭樣品槽內(nèi)的兩個(gè)金屬電極觸點(diǎn)，去除可能存在的鹽結(jié)晶或樣品殘留。待其風(fēng)干后蓋上樣品槽蓋。

（2）保持清潔：用濕布擦拭儀器外殼。

2、每周/每月：

（1）檢查樣品槽內(nèi)部是否有頑固污漬。如有，可用棉簽蘸取溫和清潔劑（如稀釋的實(shí)驗(yàn)室清潔劑）清潔，再用乙醇棉簽擦拭，確保風(fēng)干。

（2）檢查電源線和插頭是否完好。

3、注意事項(xiàng)：

（1）嚴(yán)禁向樣品槽內(nèi)直接傾倒任何液體。

（2）嚴(yán)禁使用腐蝕性、強(qiáng)酸強(qiáng)堿或丙酮類溶劑清潔電極。

（3）儀器長期不使用時(shí)，應(yīng)拔下電源插頭，并用防塵罩覆蓋。

四、故障排除

1、儀器無反應(yīng)/不啟動(dòng)：檢查電源連接和背面開關(guān)。

2、無法觸發(fā)脈沖（按下按鈕無反應(yīng)）：

（1）確認(rèn)樣品槽蓋已關(guān)閉。

（2）確認(rèn)電擊杯已正確、緊密地放置到位。

（3）確認(rèn)是否同時(shí)按下了兩個(gè)觸發(fā)按鈕。

3、電?。牭健芭?的爆裂聲，時(shí)間常數(shù)極短）：

（1）常見原因：電擊杯內(nèi)樣品體積不正確、有氣泡、或含有高鹽分。

（2）電擊杯重復(fù)使用或外壁不潔。

（3）細(xì)胞懸液中有雜質(zhì)或過濃。

（4）應(yīng)對(duì)：丟棄該樣品，使用新的電擊杯并重新制備低電導(dǎo)率的細(xì)胞懸液。

4、時(shí)間常數(shù)過短：通常與上述導(dǎo)致電弧的原因相同，或預(yù)設(shè)電壓過高。

5、時(shí)間常數(shù)過長：細(xì)胞懸液電導(dǎo)率可能過低，或電容/電阻設(shè)置不匹配。